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**組化遇到的問題及其解決辦法（表）
**組化遇到的問題及其解決辦法（表）
1、染色過強：
原因
解決辦法
抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長
降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時間：室溫1小時或4℃過夜
孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃
一般室溫20-28℃
DAB顯色時間過長或DAB濃度過高
顯色時間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準
2、非特異性背景染色：
原因
解決辦法
操作過程中沖洗不充分
每步沖洗3×5
組織中含過氧化物酶未阻斷
可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長
組織中含內源性生物素
正常非**動物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分
延長血清蛋白封閉時間
3、染色弱：
原因
解決辦法
抗體濃度過低，孵育時間過短
提高抗體濃度，孵育時間不能少于60分鐘
試劑超過有效使用期
及時更換試劑
操作中，滴加試劑時緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋
每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥）
室溫太低，低于15℃
若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱過夜）
蛋白封閉過度
封閉時間不要超過10分鐘
4、染色陰性：
原因
解決辦法
操作步驟錯誤
重新試驗，設立陽性對照
組織中無抗原
設立陽性對照片，以驗證實驗結果
一抗與二抗種屬連接錯誤
仔細確定一抗與二抗種屬無誤
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